Nucleul proiectării laboratorului PCR:
1, aspect de laborator PCR
Laboratorul de testare a amplificării PCR este împărțit în trei zone de lucru separate, în principiu: spațiul de depozitare și pregătire a reactivilor, zona de pregătire a specimenului, amplificarea și zona de analiză a produsului de amplificare. Pentru a evita contaminarea încrucișată, intrarea în fiecare zonă de lucru trebuie să urmeze strict o singură direcție, adică numai din zona de depozitare și pregătire a reactivului → zona de pregătire a epruvetei → zona de analiză a produsului de amplificare și amplificare. Transferul de reactivi și eșantioane între fiecare zonă experimentală trebuie efectuat prin fereastra de transfer.
2. Proiectarea sistemului de climatizare și ventilare a laboratorului și controlul presiunii
Laboratorul PCR nu are cerințe stricte de nivel de purificare, dar pentru a evita posibilitatea contaminării încrucișate între diverse zone experimentale, este recomandat să adoptați o formă completă de organizare a livrării și a aerului de evacuare complet. În același timp, raportul dintre alimentarea și evacuarea aerului trebuie să fie strict controlat pentru a asigura necesarul de presiune al fiecărei zone experimentale.
(1) Zona de depozitare și pregătire a reactivilor
Principalele operații în această zonă experimentală sunt prepararea reactivilor de depozitare, distribuirea reactivilor și prepararea amestecului principal de reacție. Reactivii și materialele utilizate pentru prepararea eșantionului trebuie transportate direct în această zonă și nu prin alte zone. Materiile prime cu reactiv trebuie depozitate în această zonă și preparate în reactivii de stocare necesari din această zonă. Pentru controlul presiunii fluxului de aer, această zonă ar trebui să mențină o ușoară presiune pozitivă în exterior.
(2) Zona de pregătire a eșantionului
Principalele operații în acest domeniu sunt conservarea eșantionului, extragerea acidului nucleic (ARN, ADN), stocarea și adăugarea la tubul de reacție de amplificare și măsurarea sintezei ADN-ului. Gradientul de presiune în această zonă trebuie să fie presiune pozitivă în raport cu zona adiacentă, pentru a evita poluarea aerosolilor care intră în zona din zona adiacentă. În plus, deoarece contaminarea cauzată de aerosoli poate apărea în timpul operațiunilor de încărcare a probelor, trebuie evitată mersul inutil în această zonă.
(3) Zona de analiză a produsului de amplificare și amplificare
Principalele operații în această zonă sunt amplificarea ADN-ului și determinarea fragmentelor amplificate. În plus, adăugarea șablonului de ADN preparat (din zona de preparare a eșantionului) și prepararea amestecului de reacție principal (din zona de depozitare și preparare a reactivului) într-un amestec de reacție pot fi de asemenea efectuate în această zonă. Cerințele de gradient de presiune în această zonă sunt: presiunea negativă în raport cu zona adiacentă pentru a evita scurgerea de aerosoli din această zonă. Pentru a evita poluarea cauzată de aerosoli, mersul inutil în zonă trebuie redus la minimum. Operațiunile individuale, cum ar fi adăugarea eșantionului, trebuie efectuate pe o bancă ultra-curată.
3. Prevenirea și controlul poluării
Problema de bază a proiectării laboratorului PCR este modul de a evita contaminarea. În lucrările efective, sunt frecvente următoarele tipuri de poluare: contaminarea produselor amplificate; contaminarea ADN-ului genomic natural; contaminarea reactivilor și contaminarea între epruvete. Deoarece odată ce apare poluarea, experimentul trebuie oprit până la găsirea sursei de poluare, iar rezultatul experimentului trebuie invalidat și experimentul trebuie repetat. Prin urmare, este nevoie de timp și obositor să găsești sursa de poluare în jurul laboratorului după producerea poluării și forță de muncă și resurse materiale. Prin urmare, pentru a evita poluarea, prima prioritate ar trebui să fie prevenirea, nu eliminarea.
(1) Divizarea strictă a ariei de lucru
Stabilirea fiecărei zone experimentale este rezonabilă; fiecare zonă experimentală ar trebui să aibă marcaje evidente (cum ar fi numărul casei atrăgătoare sau o culoare diferită a solului etc.) pentru a evita confuzia echipamentelor și a reactivilor din diferite zone experimentale.
(2) Setări rezonabile ale sistemului
Setările rezonabile ale sistemului de aer condiționat și de ventilație, încercați să folosiți sisteme complete de livrare și aer condiționat complet; control strict al presiunii fluxului de aer pentru a asigura cerințe diferite de presiune în diferite zone experimentale.
(3) Funcționare standard
Tehnicienii laboratorului de testare a amplificării trebuie să fie pregătiți la locul de muncă și numai după ce au fost calificați pot fi angajați în teste clinice de amplificare a genelor; în timpul operației experimentale, operatorul trebuie să poarte mănuși și să le schimbe frecvent. În plus, utilizarea capacelor de unică folosință în operațiune este, de asemenea, o măsură eficientă pentru prevenirea poluării; lucrările de curățare sunt în timp util și corecte. După terminarea lucrărilor experimentale, zona trebuie curățată imediat. În plus față de lichidul de dezinfectare convențional pentru ștergerea și dezinfectarea suprafeței sau dezinfectarea cu radiații ultraviolete de iradiere, unele echipamente experimentale ar trebui, de asemenea, să fie autoclavate.
(4) Management strict
Controlați cu strictețe personalul care intră și ies din laborator. Personalul care nu are nicio legătură cu experimentul nu are voie să intre și să părăsească laboratorul după bunul plac. Dacă este posibil, setați pasaje și uși independente pentru a intra și ieși din întreaga zonă experimentală; minimizarea mersului inutil în zona experimentală pentru a reduce posibilitatea contaminării încrucișate; produse de amplificare Zona de analiză este principala sursă de contaminare a produselor amplificate. Lichidul rezidual nu poate fi aruncat în laborator. Trebuie înmuiat și dezinfectat într-un dezinfectant și aruncat departe de laborator. Materialele de unică folosință, cum ar fi vârfurile utilizate ar trebui de asemenea dezinfectate. După înmuiere și dezinfectare, un tratament uniform, cum ar fi incinerarea, etc .; zona de analiză a produsului de amplificare poate folosi unele mutații genetice și substanțe toxice și ar trebui acordată o atenție specială protecției siguranței personalului experimentat.
(5) Instalații complete de susținere a laboratorului
Instalațiile complete de susținere a laboratorului sunt necesare pentru a asigura munca experimentală. Echipamentele și instrumentele corespunzătoare trebuie să fie echipate în funcție de conținutul experimental diferit al fiecărui laborator, cum ar fi bănci ultra-curate, centrifuge, probe etc.